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大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒說明書
更新時間:2011-07-23   點擊次數(shù):1452次

預(yù)期應(yīng)用

ELISA法定量測定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)含量。

 

實驗原理

用純化的ACE抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加進標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的ACE抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*的。顏色的深淺和樣品中的ACE呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度( 值),計算樣品濃度。

 

試劑盒組成及試劑配制

1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空缺孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加進含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

6、 檢測溶液A:1×120 /瓶(1:100)。臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋(如:10 檢測溶液A / 990 檢測稀釋液A),充分混勻,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100 /孔),實際配制時應(yīng)多配制  0.1-0.2ml。

7、 檢測溶液B:1×120 /瓶(1:100)。臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8、 底物溶液:1×10ml/瓶。

9、 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。

11、覆膜:5張

12、使用說明書:1份

操縱步驟

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)猜測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1、 加樣:分別設(shè)空缺孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??杖笨准訕悠废♂屢?100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 ,留意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效

性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2、 棄往液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37 溫育1小時。

3、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。

5、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液90 ,酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。

7、 每孔加終止溶液50 ,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)。終止液的加進順序應(yīng)盡量與底物    液的加進順序相同。

8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長丈量各孔的光密度( 值)。

說明

1、  由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,

    本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

2、  *的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操縱以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必

預(yù)備充足的標(biāo)本備份。

3、 在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的   污染,由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。

4、 試劑盒保存:請收到試劑盒后盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A和檢測溶液B保存于-20 ,其余試劑短期保存請置于4 ,長期保存則置于-20 。開封后的酶標(biāo)板要密封加干燥劑后保存于-20 ,避免濕潤。

5、 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

6、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

7、 有效期:6個月。

8、 本操縱說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。

上海通蔚生物科技有限公司

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